眾所周知，在基因工程領(lǐng)域，常用的表達系統(tǒng)共有三種，包括：原核表達系統(tǒng) (大腸桿菌 E. coli 表達系統(tǒng))、酵母表達系統(tǒng)(P. Pichia 表達系統(tǒng))和哺乳動物細胞表 達系統(tǒng)。原核表達系統(tǒng)由于操作簡單、成本低廉、表達效率高等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用 于外源基因的蛋白表達。但同時，原核表達體系也有一些自身的缺點，比如容易形 成包涵體，不能進行翻譯后加工等等。

為了盡量避免原核表達系統(tǒng)自身的不足，Cloud-Clone Corp.又另外開發(fā)建立了 酵母表達平臺。酵母表達外源基因具有一定的翻譯后加工能力，收獲的外源蛋白質(zhì) 具有一定程度上的折疊加工和糖基化修飾，性質(zhì)較原核表達的蛋白質(zhì)更加穩(wěn)定，特 別適合于表達真核生物基因和制備有功能的表達蛋白質(zhì)。某些酵母表達系統(tǒng)具有外 分泌信號序列，能夠?qū)⑺磉_的外源蛋白質(zhì)分泌到細胞外，因此很容易純化。

酵母表達外源基因的一般步驟如圖 1 所示，但是 Cloud-Clone Corp.在開發(fā)過程 中發(fā)現(xiàn)，原有的酵母表達系統(tǒng)也存在一定不足，比如誘導物甲醇易在培養(yǎng)過程中揮 發(fā)，濃度會降低，從而影響最終蛋白的產(chǎn)量等。針對這些不足，Cloud-Clone Corp. 又將以上系統(tǒng)進行了以下改進：

1. 在加入甲醇誘導目標蛋白表達過程中，通過不斷調(diào)整甲醇濃度，保持表達 體系穩(wěn)定性，以達到菌株的最佳擴增條件，保證目標蛋白產(chǎn)量的最大化；

2. 在培養(yǎng)含陽性克隆的酵母擴增期間，通過改良培養(yǎng)瓶的封口裝置，以提高 酵母擴增效率；

3. 在通過 SDS-PAGE 電泳檢測培養(yǎng)上清中目標蛋白的表達情況后，根據(jù)不同 蛋白的特性，對表達條件及純化方式進行再次優(yōu)化。

通過 Cloud-Clone Corp.的表達平臺優(yōu)化，目標蛋白的表達效率及純度都有了更 一步地提升，如圖 2 所示，在經(jīng)過改良擴增及純化方案之后，酵母表達的人 CCL18 蛋白在純化后（Lane 2），相對于純化前（Lane 1），在產(chǎn)量和純度方面都有了很 大提高，更能滿足科研人員的需要。

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