NGF活性蛋白誘導PC12細胞分化實驗

實驗原理：

神經(jīng)生產(chǎn)因子（Nerve growth factor, NGF）是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)肽，主要參與某些神經(jīng)元的生長發(fā)育、維持、再生長和分化作用。PC12細胞株來源于一種可移植的鼠嗜鉻細胞瘤，該細胞對NGF有可逆的神經(jīng)元顯形反應，當PC12細胞暴露在NGF，細胞會在一周之內作出反應，主要是停止細胞分裂并延伸神經(jīng)突。

實驗方案：

PC12細胞培養(yǎng)在含5%胎牛血清和10%馬血清的Ham's F12K培養(yǎng)基中，當細胞到達對數(shù)生長期時，換用含有10ng/ml NGF重組蛋白的新鮮培養(yǎng)基，在倒置顯微鏡下每天觀察細胞的形態(tài)。

實驗結果：

A. PC12細胞培養(yǎng)在含5%胎牛血清和10%馬血清的Ham's F12K培養(yǎng)基中，10ng/ml NGF重組蛋白刺激6天后的細胞形態(tài)；

B. PC12細胞培養(yǎng)在含5%胎牛血清和10%馬血清的Ham's F12K培養(yǎng)基中培養(yǎng)6天后的細胞形態(tài)。

結果分析：

云克隆重組NGF活性蛋白與PC12細胞共培養(yǎng)，可誘導其轉變?yōu)轭愃朴诮桓猩窠?jīng)元的形態(tài)，突起逐漸增多并延長。

NGF活性蛋白與a2M的結合活性實驗

實驗方案：

α2-巨球蛋白（Alpha-2-Macroglobulin, a2M）是NGF的一個作用因子，本實驗通過酶聯(lián)免疫吸附試驗來檢測a2M與NGF的相互作用。

1. 重組NGF蛋白用PBS，含 0.01% BSA（pH 7.4）稀釋成不同的濃度；

2. 取100μL加入到包被有人重組a2M的微孔板中，37℃條件下孵育2h；

3. 用PBST洗板，以anti-NGF多克隆抗體孵育1h，洗板3次；

4. 以HRP標記的二抗孵育，洗板3次；

5. 加入底物溶液，37℃孵育15-25min；

6. 加入終止液并在450nm波長下讀數(shù)。

實驗結果：

結果分析：

云克隆重組NGF活性蛋白與a2M有結合活性，結果顯示呈現(xiàn)劑量反應關系。

參考信息：

云克隆NGF活性蛋白貨號：APA105Hu01