鐵調(diào)素（Hepcidin，Hepc）是鐵代謝的調(diào)節(jié)因子。Hepcidin通過與位于腸道腸上皮細胞基底外側(cè)表面和網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞（巨噬細胞）質(zhì)膜上的膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白（ferroportin，F(xiàn)PN）結(jié)合來抑制鐵離子的轉(zhuǎn)運。Hepc最終分解溶酶體中的轉(zhuǎn)運蛋白，抑制FPN而阻止鐵離子的輸出，鐵離子被隔離在細胞中。

實驗目的

FPN已被鑒定為Hepc的相互作用因子，因此采用結(jié)合ELISA法檢測重組人Hepc與重組人FPN的相互作用。

實驗步驟：

用含有0.01%BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋Hepc。將100uL樣本移入FPN蛋白預包被的酶標板中，37℃反應2小時。棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。加入抗Hepc的pAb后孵育1小時，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。再加入HRP標記的二抗孵育后，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。加入底物溶液，在37℃孵育15-25分鐘。最后，向孔中加入50μL終止液，并立即在450nm下讀數(shù)。

實驗結(jié)果：Hepc與FPN的結(jié)合活性如Figure 1所示。

實驗結(jié)論：

Hepc可與FPN的結(jié)合，且這種作用呈劑量依賴性。

參考信息：

云克隆鐵調(diào)素（Hepc）活性蛋白貨號：APB979Hu61