過敏毒素C5a是補體系統(tǒng)的組成部分，能夠促進中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞向血管壁的遷移及粘附。C5a可誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞趨化遷移。因此，采用24孔細(xì)胞遷移/趨化分析系統(tǒng)，檢測C5a對人單核細(xì)胞株THP-1的趨化作用。

實驗步驟：

將THP-1細(xì)胞接種到趨化小室的上室（100μL細(xì)胞懸浮液，10^6個細(xì)胞/mL重置于含有0.5%FBS的RPMI 1640中），將重組過敏毒素C5a（用無血清RPMI 1640分別稀釋至50ng/mL和100ng/mL）加入趨化小室的下室。上室和下室使用聚碳酸酯過濾器（8μm孔徑）分隔。由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而研究C5a對THP-1的趨化作用。在37℃，5%CO2孵育2小時后，除去過濾器，倒置顯微鏡低倍鏡（×100）觀察低室細(xì)胞，用高倍鏡（×400）隨機計數(shù)遷移細(xì)胞數(shù)（每個濾器5個視野）。

實驗結(jié)果：

C5a能誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞遷移。低倍鏡下（×100）遷移的THP-1細(xì)胞如圖1所示。

圖1. C5a對THP-1細(xì)胞的趨化作用

（A）將THP-1細(xì)胞接種于趨化小室的上室，在下室加入50ng/mL的C5a，孵育3h后在低倍鏡下（×100）觀察細(xì)胞；

（B）將THP-1細(xì)胞接種于趨化小室的上室，下室加入100ng/ml的C5a，孵育3h后低倍鏡（×100）觀察細(xì)胞；

（C）將THP-1細(xì)胞接種于趨化小室的上室，在下室加入無C5a的無血清RPMI 1640，孵育3h后低倍鏡（×100）觀察細(xì)胞。

在高倍鏡下（×400）隨機選擇5個視野對遷移細(xì)胞進行計數(shù)，統(tǒng)計數(shù)據(jù)如圖2所示

圖2. C5a對THP-1細(xì)胞的趨化作用。

云克隆產(chǎn)品：

APA388Hu61 Active Complement Component 5a (C5a)