瘦素（leptin，LEP）是一種由白色脂肪細(xì)胞產(chǎn)生的激素，可通過(guò)抑制饑餓來(lái)幫助調(diào)節(jié)能量平衡。其前體由167個(gè)氨基酸組成，在血液中被切除N端信號(hào)肽，形成Leptin（16kD）。Leptin最為重要的生物學(xué)效應(yīng)是通過(guò)下丘腦含神經(jīng)肽的神經(jīng)元和神經(jīng)肽受體介導(dǎo)的，可抑制食欲，減少能量攝取，增加能量消耗以及抑制脂肪合成。盡管調(diào)節(jié)脂肪儲(chǔ)存被認(rèn)為是Leptin的主要功能，但它也在生長(zhǎng)、生殖等生理過(guò)程中發(fā)揮作用。除了脂肪細(xì)胞和下丘腦細(xì)胞，在全身各個(gè)組織細(xì)胞中都能發(fā)現(xiàn)瘦素受體。瘦素和機(jī)體系統(tǒng)的病理生理相關(guān)性正逐步被人們了解發(fā)掘。

實(shí)驗(yàn)原理：Hexokinase 3，White Cell（HK3）已被鑒定為L(zhǎng)EP的相互作用因子。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)結(jié)合ELISA檢測(cè)重組人LEP和重組HK3蛋白的相互作用。

實(shí)驗(yàn)方法：用含有0.01% BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋LEP。將100μL樣品移入HK3蛋白預(yù)包被酶標(biāo)板中，37℃孵育2小時(shí)。棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗滌。除去洗液，加入抗LEP-pAb孵育1小時(shí)，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育后，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次。加入底物溶液后，在37℃下孵育15-25分鐘。最后，向孔中加入50μL終止液，立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：LEP和HK3的結(jié)合活性如Figure 1所示，結(jié)合活性呈劑量依賴性。 

云克隆產(chǎn)品

APA084Hu01 Active Leptin (LEP)