人們普遍認為，生育和哺乳能夠降低乳腺癌的長期風險。目前學術界認為，生育通過重塑妊娠期、哺乳期及復舊期乳腺上皮細胞分化與生長通路發(fā)揮保護作用，從而隨時間推移降低乳腺組織的惡性轉化。值得注意的是，哺乳似乎對三陰性乳腺癌（TNBC）的風險降低具有更顯著的保護作用。本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)產會誘導CD8? T細胞在正常乳腺組織中的積聚，其中包括具有組織駐留記憶樣表型的細胞。在小鼠模型中，經(jīng)歷妊娠、哺乳及復舊的過程，驅動了CD8? T細胞在乳腺內的積累。這一現(xiàn)象伴隨著腫瘤生長減緩及瘤內免疫細胞浸潤增加，而清除CD8? T細胞則會消除這些保護效應。重要的是，這種CD8? T細胞依賴性的腫瘤控制作用，僅在完成完整的哺乳及退化復原周期后才被觀察到。與此一致的是，經(jīng)產女性的原發(fā)性TNBC組織表現(xiàn)出更強的T細胞浸潤和更好的臨床預后。這些橫跨臨床前模型及逾千份患者樣本的研究結果，共同揭示了生殖史如何塑造乳腺免疫，確立了CD8? T細胞作為經(jīng)產相關保護關鍵介導者的地位，并為乳腺癌的預防和治療新策略提供了依據(jù)。

1. 經(jīng)產與女性正常乳腺組織中T細胞特征的關聯(lián)性

為評估生殖史如何影響正常乳腺組織的免疫狀態(tài)，首先比較了經(jīng)產與未產女性未患癌乳腺組織中CD8? T細胞的數(shù)量和表型。通過對Reed等人整理的四個數(shù)據(jù)集中的單細胞轉錄組數(shù)據(jù)進行分析，發(fā)現(xiàn)與未產女性相比，經(jīng)產女性（≥1次足月妊娠）的CD3?、CD8?以及CD8?織駐留記憶樣T細胞（T_RM）的比例顯著更高。流式細胞術評估未患癌健康乳腺組織中的免疫浸潤情況，發(fā)現(xiàn)經(jīng)產女性表達組織駐留典型標志物CD69和CD103的T_RM樣細胞比例顯著高于未產女性。多重熒光免疫組化技術進一步證實，經(jīng)產女性的乳腺組織中CD69?CD103?CD8? T_RM樣細胞群數(shù)量顯著高于未產女性，這些細胞主要定位于上皮內或導管周圍。CD69?CD103?CD8? T細胞在妊娠后穩(wěn)定維持超過30年，并且與其CD69?CD103?CD8? T細胞相比，顯示出更優(yōu)的長期保留，這與先前觀察到CD103? T_RM樣細胞隨時間推移占主導地位的結果一致。為研究與生產和哺乳相關的乳腺相關CD8? T細胞質性差異，在經(jīng)產乳腺T_RM樣細胞中鑒定出差異表達基因，包括上調的ITGAE、ITGA1和CXCR6等，稱之為“經(jīng)產乳腺相關（PB）-T_RM特征”。對包含109例未患癌女性正常乳腺組織樣本的獨立數(shù)據(jù)集分析顯示，與未產女性相比，經(jīng)產女性組織中該特征信號呈現(xiàn)顯著陽性富集，這證實了生育相關的轉錄差異。

圖1. 經(jīng)產與女性正常乳腺組織中T細胞特征的關聯(lián)性

（圖片源于《Nature》）

2. 哺乳與復舊促進健康小鼠乳腺脂肪墊中CD8? T細胞的增加

隨后研究不同品系（C57BL/6和BALB/c）小鼠在妊娠、哺乳及復舊階段乳腺脂肪墊（MFP）的免疫細胞群，設置三個實驗組：（i）完整自然哺乳周期（21天）后離乳，在乳腺恢復至孕前狀態(tài)時（復舊后第28天，d28-inv）；（ii）早期強制離乳（FW）復舊，幼鼠在出生12-24小時內移除以實現(xiàn)最低限度哺乳，在復舊后第10天（d10-FW）；（iii）與經(jīng)產鼠年齡匹配的未生育對照組（virgin），發(fā)現(xiàn)d28-inv組CD45⁺細胞總數(shù)、CD8⁺ T細胞總數(shù)（包括表達CD69⁺CD103^-和CD69⁺CD103⁺的CD8⁺ T細胞亞群）、CD45⁺細胞群中CD44^hiCD8⁺ T細胞數(shù)明顯高于virgin組。為進一步表征生產相關CD8⁺ T細胞，我們進行了高維蛋白質組學分析。結果顯示與virgin組相比，d28-inv組有三個細胞簇顯著富集，這三個細胞簇均表達CD69、CD103、CD49a等經(jīng)典組織駐留標記物。

圖2. 哺乳與復舊促進健康小鼠乳腺脂肪墊中CD8? T細胞的增加

（圖片源于《Nature》）

3. 哺乳與復舊抑制小鼠乳腺腫瘤生長

為深入探究復舊不同階段對腫瘤進展的影響，使用TNBC原位癌小鼠模型，對比分析d28-inv、d10-FW小鼠MFP的腫瘤生長情況，并以同齡virgin小鼠作為對照。結果顯示，d10-FW組小鼠的腫瘤生長與對照組無差異；而d28-inv組小鼠的腫瘤生長則顯著減緩。同時發(fā)現(xiàn)d28-inv組腫瘤中CD8⁺ T細胞數(shù)量顯著增加，包括CD69⁺CD103⁺組織駐留T_RM細胞群，單核細胞、CD4⁺ Th1細胞、樹突狀細胞及XCR1⁺ I型樹突狀細胞也有所增加。

圖3. 哺乳與復舊抑制小鼠乳腺腫瘤生長

（圖片源于《Nature》）

4. 經(jīng)產誘導的腫瘤保護由CD8⁺ T細胞介導

為探究經(jīng)產小鼠腫瘤生長減緩是否由T細胞介導，我們在缺乏NK細胞、T細胞和B細胞的RAG2^?/?γc^?/?小鼠模型中，對virgin組和d28-inv組小鼠接種AT3-OVA腫瘤細胞，結果顯示兩組腫瘤生長無顯著差異。為驗證CD8? T細胞能否重建保護效應，以上兩組小鼠分別輸注源自OT-I轉基因小鼠的初始CD8? T細胞，發(fā)現(xiàn)d28-inv組腫瘤生長顯著被抑制，且d28-inv組腫瘤內CD45?及TCR-vα2?CD8? T細胞數(shù)量較virgin組升高。進一步驗證CD8? T細胞在經(jīng)產介導保護中的必要性，通過抗體清除CD8α?、CD8β?或CD4? T細胞發(fā)現(xiàn)：單獨清除CD8α或CD8β均能顯著削弱d28-inv組的抗腫瘤保護，證明CD8αβ? T細胞是關鍵效應細胞。為評估局部CD8? T細胞是否足以控制腫瘤，研究人員使用S1PR1激動劑——FTY720阻斷T細胞向外周遷移，經(jīng)FTY720處理的d28-inv組小鼠喪失腫瘤保護能力，且腫瘤特異性CD8? T細胞減少。以上數(shù)據(jù)說明，經(jīng)產誘導的腫瘤保護由CD8αβ? T細胞介導，哺乳及復舊期后，腫瘤攻擊可同時驅動乳腺駐留T細胞擴增與循環(huán)腫瘤特異性效應細胞招募，從而增強免疫監(jiān)視與腫瘤清除能力。

圖4. 經(jīng)產誘導的腫瘤保護由CD8⁺ T細胞介導

（圖片源于《Nature》）

5. 母乳喂養(yǎng)與TNBC的免疫細胞浸潤相關

在證實小鼠哺乳及復舊后腫瘤生長減緩依賴于CD8⁺ T細胞的基礎上，進一步探究在人類TNBC中是否存在類似關聯(lián)。研究團隊分析了包含934名早期乳腺癌女性的馬來西亞MyBrCa隊列，發(fā)現(xiàn)經(jīng)產且母乳喂養(yǎng)過的女性，其TNBC腫瘤的免疫浸潤評分顯著高于未生育或未母乳喂養(yǎng)的患者；且之前發(fā)現(xiàn)的PB-T_RM特征基因在這些腫瘤中也高度富集，凸顯了PB-T_RM特征對生育和復舊的特異性。進一步研究發(fā)現(xiàn)，有過哺乳經(jīng)歷的經(jīng)產女性腫瘤內CD8⁺ T細胞密度顯著高于未生育女性。另外比較了擁有哺乳史和生存結局數(shù)據(jù)的270名澳大利亞女性的獨立隊列，發(fā)現(xiàn)哺乳患者的乳腺癌確診后總生存期顯著長于未哺乳患者，HE染色分析發(fā)現(xiàn)哺乳時長最長的個體腫瘤淋巴細胞浸潤數(shù)量最多。確診乳腺癌后的總體生存期比未母乳喂養(yǎng)的患者延長近60%（風險比HR=0.39，95% CI：0.19-0.79）。數(shù)字病理分析顯示，母乳喂養(yǎng)時間越長，腫瘤中的淋巴細胞浸潤量越多。

圖5. 母乳喂養(yǎng)與TNBC的免疫細胞浸潤相關

云克隆開發(fā)了涉及上述研究相關靶標的蛋白、抗體以及試劑盒產品，靶標及核心貨號如下，供參考：