活化的caspase 3的檢測
查看詳情Caspase (Cysteine aspartic acid specific protease，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶) 是近年發(fā)現(xiàn)的一組存在于細(xì)胞質(zhì)中，活化位點(diǎn)均含有半胱氨酸，且特異性斷開天冬氨酸殘基后肽鍵的蛋白酶。Caspase在細(xì)胞程序性死亡（又稱凋亡，apoptosis）中起重要作用。迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的人的caspase家族成員已達(dá)12種。Caspase 3 是caspase家族的一個重要成員，其在細(xì)胞凋亡過程中作為最主要的終末剪切酶行使作用。該蛋白由pro-caspase 3 酶原經(jīng)過進(jìn)一步的加工而形成，pro-caspase 3 是一個含有277個氨基酸殘基的前體蛋白，對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，可以分......
IN-FUSION一種高效無酶連接技術(shù)
查看詳情在傳統(tǒng)的分子克隆中，我們經(jīng)常通過PCR技術(shù)擴(kuò)增得到目的基因后，先構(gòu)建T-A克隆載體，將基因在大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增，然后酶切陽性T-A載體和目標(biāo)載體，最后進(jìn)行目的基因和目的載體的連接。這個過程大概需要1-2周來完成，而且具有很大的局限性，主要表現(xiàn)在：1、載體多克隆位點(diǎn)和基因內(nèi)部酶切位點(diǎn)的局限性；2、基因克隆過程中需要添加酶切位點(diǎn)，可能會帶入非特異性擴(kuò)增；3、對于長片段與目標(biāo)載體的連接效果差；4、無法實(shí)現(xiàn)大規(guī)模載體的構(gòu)建。IN-FUSION技術(shù)主要來源于INFUSION酶的發(fā)現(xiàn)，（如圖）INFUSION酶能夠識別線性化的DNA片段5’......
膠原類的特點(diǎn)以及檢測方法
查看詳情膠原，主要存在于動物結(jié)締組織中的結(jié)構(gòu)蛋白，是哺乳動物中含量最豐富的蛋白質(zhì)，占到了整個體內(nèi)蛋白含量的25-35%。膠原可分為纖維型和非纖維型。最常見的是Type I，Type II，Type III，Type IV，Type V。其中Type I，II，III，V均是纖維型，而Type IV是非纖維型。人體絕大多數(shù)組織器官都含有膠原，目前為止共發(fā)現(xiàn)了28種膠原，而90%以上都是一型膠原。膠原可用于整容外科手術(shù)，骨移植，組織再生，傷口治愈等方面；然而膠原突變會引起各類疾病包括成骨不全癥，軟骨發(fā)育不全，埃勒斯-當(dāng)洛斯綜合征，遺傳性進(jìn)行性腎炎，骨質(zhì)疏松癥，Knobl......
單抗還是多抗？多肽還是重組蛋白？
查看詳情我們收到這樣一個定制抗體的訂單詢問，我要定制一個針對小鼠Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG)某一段序列的抗體，這段序列包含35-55位氨基酸，那么我是需要單克隆抗體好還是多克隆抗體好？制備抗體的時候是用多肽作為免疫原好還是用重組蛋白作為免疫原好呢？首先，我們來看看單克隆抗體和多克隆抗體的主要區(qū)別在哪里呢？單克隆抗體是針對單一抗原決定簇，來自單個B淋巴細(xì)胞克隆的抗體，多克隆抗體是針對多個抗原決定簇，由多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體。通常來說一個含有多個抗原決定簇的大分子免疫原進(jìn)入機(jī)體后，其不同......
常見免疫檢測的抗體標(biāo)記種類
查看詳情標(biāo)記抗體是免疫電鏡樣品制備的一種常見方法，該技術(shù)由于操作簡單、靈敏度高，常應(yīng)用于IHC，WB，ICC，ELISA等實(shí)驗(yàn)。通過標(biāo)記物的增強(qiáng)放大效應(yīng)來定位分析抗原，是目前市面上理想的快速價廉的定量檢測方法。抗體標(biāo)記主要有酶標(biāo)記、熒光素標(biāo)記、同位素標(biāo)記、生物素標(biāo)記等，還有一些其他的標(biāo)記方法例如膠體金標(biāo)記，下面具體來展示云克隆公司研發(fā)的抗體標(biāo)記種類：1、辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記，HRP標(biāo)記單抗和多抗的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基被氧化成醛基，隨后與抗體蛋白的氨基結(jié)合，形成Schiff堿。常用的HRP的底物有鄰苯......
APOB家族及其受體的檢測
查看詳情人體APOB由APOB基因進(jìn)行編碼，血漿中極低密度脂蛋白(VLDL )，中間密度脂蛋白(IDL)中均含有APOB。APOB的水平變化與脂質(zhì)代謝，動脈粥樣硬化等腦血管等疾病密切相關(guān)，是目前臨床研究的熱點(diǎn)。APOB在LDL中發(fā)揮作用的機(jī)理功能尚待研究。血漿中APOB以APOB48和APOB100這兩種形式存在，其中APOB48主要在小腸中合成，而APOB100主要在肝臟中合成。APOB100是APOB群中最大的蛋白，通常提到的APOB實(shí)際上指的就是APOB100，它有4563個氨基酸。APOB48與APOB100有共同的N端結(jié)構(gòu)，它是由編碼APOB100的基因序列在第2153個氨基酸處產(chǎn)生了終止密碼子而編碼......
免疫組織化學(xué)原理圖
查看詳情免疫組織化學(xué)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)，是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測定的一項(xiàng)新技術(shù)。原理圖如下：最常選用的免疫學(xué)檢測方案之一。免疫組化實(shí)驗(yàn)中抗原修復(fù)方法的選擇，抗體工作濃度的確定和染色方案等步驟都是決定實(shí)驗(yàn)成敗與否的關(guān)鍵。許多實(shí)驗(yàn)人員面對繁瑣的實(shí)驗(yàn)步驟，往往得到了不盡如人意的結(jié)果。在此，提前告訴大家一個好消息，Cloud-clone. Corp已開展免疫組化代測服務(wù)?。?！具體情況，會在下一次的專題中公布，敬請期待！更多信息，請查閱htt......
重組蛋白的詳細(xì)構(gòu)建方法
查看詳情應(yīng)用重組DNA將目標(biāo)基因進(jìn)行表達(dá)得到的蛋白質(zhì)成為重組蛋白，重組蛋白在生物信號傳導(dǎo)過程，藥物研發(fā)，科學(xué)研究中扮演著重要角色。下面來介紹一下重組蛋白的生產(chǎn)工藝流程。1.基因擴(kuò)增（1）引物合成搜索目標(biāo)蛋白基因信息，結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)信息，選取片段或全長設(shè)計引物。注意避開跨膜區(qū)，以及復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu)，優(yōu)選N端或C端，引物評分盡可能高，并搜索出核酸序列的酶切位點(diǎn)，使用載體等信息。經(jīng)研發(fā)部根據(jù)研發(fā)經(jīng)驗(yàn)提出修改意見最終定稿后交由第三方公司進(jìn)行引物合成。（2）基因克隆機(jī)重組鑒定1）PCR根據(jù)目的蛋白特異性表達(dá)組織，選取特異......